Nieciągła elektroforeza - Discontinuous electrophoresis
Lamela elektroforezy (potocznie elektroforezy płyty ) jest typu poliakrylamid elektroforezy żelowej . Został opracowany przez Ornsteina i Davisa. Ta metoda zapewnia wysoką rozdzielczość i dobrą definicję pasma. Jest to szeroko stosowana technika rozdzielania białek według rozmiaru i ładunku.
metoda
W tej metodzie żel dzieli się na dwie nieciągłe części, żel rozdzielający i układający się w stos, oba mają różne stężenia poliakryloamidu. Ten o niższej koncentracji jest układany na wierzchu o wyższym stężeniu. Nieciągłość opiera się na czterech parametrach: strukturze żelu, wartości pH buforu, sile jonowej buforu oraz naturze jonów w żelu i buforze elektrodowym. Bufor elektrody zawiera glicynę . Glicyna ma bardzo niski ładunek netto przy pH 6,8 żelu układającego się w stos, więc ma niską ruchliwość . Białka są rozdzielane zgodnie z zasadą izotachoforezy i tworzą stosy w kolejności ruchliwości (efekt spiętrzenia). Mobilność zależy od ładunku netto, a nie od rozmiaru cząsteczki. Białka powoli przesuwają się w kierunku anody ze stałą prędkością, aż osiągną granicę oddzielania żelu. Nagle opór tarcia wzrasta, ale glicyna nie ulega zmianie i przechodzi przez białka i staje się silnie naładowana w strefie rozdzielania. Białka obecne w jednorodnym buforze zaczynają się rozdzielać w oparciu o zasady elektroforezy strefowej. Teraz ich mobilność zależy zarówno od wielkości, jak i ładunku. Wartość pH wzrasta do 9,5, a ładunek netto wzrasta.