Bejca H&E - H&E stain

Siatkówka (część oka ) barwiona hematoksyliną i eozyną , jądra komórkowe barwione na niebiesko-fioletowo, a materiał zewnątrzkomórkowy barwiony na różowo.

Barwienie hematoksyliną i eozyną ( lub barwienie hematoksyliną i eozyną lub barwienie hematoksyliną z eozyną ; często określane skrótem jako barwienie H&E lub barwienie HE ) jest jednym z głównych barwników tkankowych stosowanych w histologii . Jest to najczęściej stosowana plama w diagnostyce medycznej i często stanowi złoty standard . Na przykład, gdy patolog patrzy na biopsję podejrzenia raka , sekcja histologiczna prawdopodobnie zostanie zabarwiona H&E.

H&E to połączenie dwóch barwników histologicznych: hematoksyliny i eozyny . Hematoksylina barwi jądra komórkowe na fioletowo-niebieski kolor, a eozyna barwi macierz zewnątrzkomórkową i cytoplazmę na różowo, przy czym inne struktury przybierają różne odcienie, odcienie i kombinacje tych kolorów. Patolog może więc łatwo odróżnić jądrową i cytoplazmatyczną część komórki, a dodatkowo ogólne wzory zabarwienia plamy pokazują ogólny układ i rozmieszczenie komórek oraz zapewniają ogólny przegląd struktury próbki tkanki. Zatem rozpoznawanie wzorców, zarówno przez samych ekspertów, jak i przez oprogramowanie, które pomaga tym ekspertom (w patologii cyfrowej ), dostarcza informacji histologicznych.

Ta kombinacja plam została po raz pierwszy wprowadzona w 1876 r. przez A. Wissowzky'ego.

Zastosowania

Procedura barwienia H&E jest głównym barwieniem w histologii, po części dlatego, że można ją wykonać szybko, nie jest droga i barwi tkanki w taki sposób, że ujawnia się znaczna część anatomii mikroskopowej i może być stosowana do diagnozowania szerokiego zakresu stany histopatologiczne . Wyniki barwienia H&E nie są nadmiernie zależne od substancji chemicznej użytej do utrwalenia tkanki lub niewielkich niezgodności w protokole laboratoryjnym, a te czynniki przyczyniają się do jego rutynowego stosowania w histologii.

Barwienie H&E nie zawsze zapewnia wystarczający kontrast, aby odróżnić wszystkie tkanki, struktury komórkowe lub rozmieszczenie substancji chemicznych iw takich przypadkach stosuje się bardziej szczegółowe barwienia i metody.

Sposób aplikacji

Stojak na szkiełka wyjmowane z kąpieli z barwnikiem hematoksyliną.

Istnieje wiele sposobów przygotowania roztworów hematoksyliny (preparatu) stosowanych w procedurze H&E, ponadto istnieje wiele protokołów laboratoryjnych do wytwarzania preparatów barwionych H&E, z których niektóre mogą być specyficzne dla danego laboratorium. Chociaż nie ma standardowej procedury, umownie wyniki są dość spójne, ponieważ jądra komórkowe są zabarwione na niebiesko, a cytoplazma i macierz zewnątrzkomórkowa są zabarwione na różowo. Laboratoria histologiczne mogą również dostosować ilość lub rodzaj barwienia dla konkretnego patologa.

Po pobraniu tkanek (często w postaci biopsji ) i utrwaleniu, są one zazwyczaj odwadniane i zatapiane w roztopionym wosku parafinowym , a powstały blok jest montowany na mikrotomie i cięty na cienkie plasterki. Plastry przykleja się do szkiełek mikroskopowych, po czym wosk usuwa się rozpuszczalnikiem, a plastry tkanki przyczepione do szkiełek są ponownie nawadniane i gotowe do barwienia. Alternatywnie, barwnik H&E jest najczęściej stosowanym barwnikiem w chirurgii Mohsa, w której tkanki są zazwyczaj zamrażane, cięte na kriostacie (mikrotom, który tnie zamrożoną tkankę), utrwalane w alkoholu, a następnie barwione.

Sposób barwienia H & E wymaga stosowania hematoksyliną miesza się z solą metalu lub zaprawa , często następuje płukanie w słabym roztworze kwasu w celu usunięcia nadmiaru barwienia ( różnicowania ), a następnie przez fa w łagodnie zasadowym wody. Po zastosowaniu hematoksyliny tkankę barwi się kontrastowo eozyną (najczęściej eozyną Y ).

Wyniki

Hematoksyliną głównie Kolory jądra z komórek niebieski lub ciemno purpurowy, a także kilka innych tkanek, takich jak keratohyalin granulek i zwapnienia materiału. Eozyna barwi cytoplazmę i niektóre inne struktury, w tym macierz zewnątrzkomórkową, taką jak kolagen, nawet w pięciu odcieniach różu. Struktury eozynofilowe (substancje barwione eozyną) składają się na ogół z białek wewnątrzkomórkowych lub zewnątrzkomórkowych . W ciałami Lewy'ego i organy Mallory są przykłady struktur kwasochłonnych. Większość cytoplazmy jest eozynofilowa i jest różowa. Czerwone krwinki są intensywnie czerwone.

Sposób działania

Chociaż hemateina , utleniona forma hematoksyliny, jest aktywnym barwnikiem (w połączeniu z zaprawą), plama jest nadal nazywana hematoksyliną . Hematoksylina w połączeniu z zaprawą (najczęściej ałunem glinowym ) jest często uważana za „przypominająca” barwnik zasadowy, dodatnio naładowany lub kationowy . Eozyna jest barwnikiem anionowym (naładowanym ujemnie) i kwasowym. Barwienie jąder przez hemal (kombinację jonów glinu i hemateiny) jest zwykle spowodowane wiązaniem kompleksu barwnik-metal z DNA, ale barwienie jąder można uzyskać po ekstrakcji DNA z skrawków tkanek. Mechanizm różni się od barwienia jądra za pomocą zasadowych (kationowych) barwników, takich jak tionina lub błękit toluidynowy . Barwienie barwnikami zasadowymi występuje tylko w roztworach mniej kwaśnych niż hemal i zapobiega się temu przez uprzednią chemiczną lub enzymatyczną ekstrakcję kwasów nukleinowych. Istnieją dowody wskazujące, że wiązania koordynacyjne, podobne do tych, które łączą glin i hemateinę, wiążą kompleks hemalum z DNA i grupami karboksylowymi białek w chromatynie jądrowej .

Struktury nie muszą być kwaśne ani zasadowe, aby można je było nazwać bazofilowymi i eozynofilowymi; terminologia opiera się na powinowactwie składników komórkowych do barwników. W próbce mogą występować inne kolory, np. żółty i brązowy; są spowodowane przez wewnętrzne pigmenty, takie jak melanina . Blaszki podstawne należy wybarwić barwnikiem PAS lub kilkoma srebrami , jeśli mają być dobrze widoczne. Włókna siatkowate wymagają również srebrzenia. Struktury hydrofobowe również mają tendencję do pozostawania czystymi; są one zwykle bogate w tłuszcze, np. adipocyty , mielinę wokół aksonów neuronów i błony aparatu Golgiego .

Przykłady tkanek barwionych H&E

Bibliografia

Dalsza lektura

  • Kiernan JA (2008) Metody histologiczne i histochemiczne: teoria i praktyka. 4 wyd. Bloxham, Wielka Brytania: potomek.
  • Lillie RD, Pizzolato P, Donaldson PT (1976) Jądrowe plamy z rozpuszczalnymi metachromowymi barwnikami zaprawowymi. Efekt reakcji chemicznego blokowania grup końcowych i sztucznego wprowadzania grup kwasowych do tkanek. Histochemia 49: 23-35.
  • Llewellyn BD (2009) Barwienie jądrowe hematoksyliną ałunu. Biotechnologia. Histochem. 84: 159–177.
  • Puchtler H, Meloan SN, Waldrop FS (1986) Zastosowanie aktualnych pojęć chemicznych do barwników metal-hematein i -brazylein. Histochemia 85: 353-364.

Zewnętrzne linki

Protokół