Allofikocyjanina - Allophycocyanin
Allofikocyjanina („inne błękitne białko alg”; z greckiego : ἄλλος (allos) oznacza „inny”, φύκος (phykos) oznacza „alga”, a κυανός (kyanos) oznacza „niebieski”) to białko z rodziny fikobiliprotein zbierających światło , wraz z fikocyjaniną , fikoerytryną i fikoerytrocyjaniną . Jest dodatkowym pigmentem dla chlorofilu . Wszystkie fikobiliproteiny są rozpuszczalne w wodzie i dlatego nie mogą istnieć w błonie, podobnie jak karotenoidy , ale skupiają się, tworząc skupiska, które przylegają do błony zwanej fikobilisomami . Allofikocyjanina absorbuje i emituje czerwone światło (max 650 i 660 nm, odpowiednio), i jest łatwo znaleźć w sinic (zwane również sinice ) i krasnorostów . Pigmenty fikobiliny mają właściwości fluorescencyjne, które są używane w zestawach do testów immunologicznych . W cytometrii przepływowej często jest to skrót APC. Aby być efektywnie wykorzystywane w zastosowaniach takich jak FACS , High-Throughput Screening (HTS) i mikroskopia , APC musi być usieciowane chemicznie.
Charakterystyka strukturalna
Allofikocyjaninę można wyizolować z różnych gatunków alg czerwonych lub niebiesko-zielonych, z których każdy wytwarza nieco inne formy cząsteczki. Składa się z dwóch różnych podjednostek (α i β), w których każda podjednostka ma jeden chromofor fikocyjanobiliny (PCB). Struktura podjednostki dla APC została określona jako (αβ) 3 . Masa cząsteczkowa APC wynosi 105 000 daltonów.
Charakterystyka widmowa
Maksymalna absorpcja | 652 nm |
Dodatkowy pik absorpcji | 625 nm |
Maksymalna emisja | 657,5 nm |
Stokes Shift | 5,5 nm |
Współczynnik ekstynkcji | 700 000 M −1 cm −1 |
Wydajność kwantowa | 0.68 |
Jasność | 1,6 x 10 5 M −1 cm −1 |
Usieciowany APC
Jak wspomniano powyżej, aby APC była użyteczna w testach immunologicznych, musi najpierw zostać usieciowana chemicznie, aby zapobiec dysocjacji na jej składowe podjednostki, gdy znajduje się we wspólnych buforach fizjologicznych. Konwencjonalny sposób osiągnięcia tego polega na destrukcyjnym procesie, w którym traktowany trimer APC jest chemicznie rozbijany w 8 M moczniku, a następnie pozostawia się do ponownego połączenia w buforze fizjologicznym. Można zastosować alternatywną metodę, która zachowuje strukturalną integralność trimeru APC i pozwala na jaśniejszy, bardziej stabilny produkt końcowy.
Aplikacje
Wiele aplikacji i instrumentów zostało opracowanych specjalnie dla allofikocyjaniny. Jest on powszechnie stosowany w testach immunologicznych , takie jak FACS , cytometrii przepływowej i High Throughput Screening jako akceptora europ poprzez czasowo-rozdzielczej z transferem energii rezonansowej fluorescencji Energetycznego (TR-FRET) testów.