Ekstrahowalny antygen jądrowy - Extractable nuclear antigen

Ekstrahowalne antygeny jądrowe (ENA) to ponad 100 różnych rozpuszczalnych antygenów cytoplazmatycznych i jądrowych . Są one znane jako „ekstrahowalne”, ponieważ można je usunąć z jąder komórkowych za pomocą soli fizjologicznej i reprezentują sześć głównych białek: Ro, La, Sm, RNP, Scl-70, Jo1. Większość ENA jest częścią spliceosomów lub kompleksów nukleosomów i jest rodzajem małej jądrowej rybonukleoproteiny (snRNPS). Lokalizacja w jądrze i asocjacja ze spliceosomami lub nukleosomami powoduje, że te ENA są związane z dodatkowym RNA i białkami, takimi jak polimerazy. Ta jakość ENA często utrudnia oczyszczenie i ilościowe określenie ich obecności do użytku klinicznego.

Zastosowania kliniczne

Ekstrahowalnych antygenów jądrowych panelu , lub ENA Panel testuje na obecność przeciwciał w krwi, które reagują z białkami w jądrze komórkowym. Zwykle wykonywane jako kontynuacja pozytywnego testu na przeciwciała przeciwjądrowe ( ANA ) i jeden wykazuje objawy choroby autoimmunologicznej . ANA testuje obecność lub brak autoprzeciwciał, podczas gdy panel ENA ocenia, które białka w jądrze komórkowym rozpoznają autoprzeciwciała. Panel ENA pomaga w diagnozowaniu, rozróżnianiu i monitorowaniu postępu chorób autoimmunologicznych i jest wykonywany za pomocą prostego pobrania krwi. Podczas gdy poziomy autoprzeciwciał mogą się zmieniać przez całe życie, kiedy już rozwiniesz autoprzeciwciała, zawsze będziesz je mieć. Autoprzeciwciała przeciwko tym antygenom są związane ze szczególnymi zaburzeniami tkanki łącznej. Rzeczywiście, w 84,3% pozytywnych próbek anty-ENA znaleziono również odczynniki ANA. Zastosowanie testów autoprzeciwciał anty-ENA może służyć jako dodatkowa weryfikacja choroby autoimmunologicznej, ponieważ sam pozytywny wynik testu ANA nie wystarcza do postawienia diagnozy. W rzeczywistości niski poziom ANA można znaleźć u zdrowych pacjentów. Zastosowania testów anty-ENA różnią się od wykluczania grup pacjentów z określonych grup, chorób tkanki łącznej i monitorowania aktywności choroby. Zasadniczo pozwala klinicystom wykluczyć określone zaburzenia autoimmunologiczne, jeśli nie występuje określone autoprzeciwciało, i pozwala klinicystom śledzić postęp choroby, jeśli poziomy tych autoprzeciwciał wzrastają lub spadają. Aby potwierdzić obecność przeciwciał anty-ENA, obecnie zaleca się stosowanie dwóch lub więcej metod potwierdzania przeciwciał anty-ENA w celu uniknięcia wyników fałszywie dodatnich. Diagnoza autoimmunologicznych chorób tkanki łącznej (CTD) odbywa się poprzez analizę objawów klinicznych i oznak, ale także poprzez identyfikację autoprzeciwciał skierowanych przeciwko antygenom jądrowym. Artykuł z 2002 r. ma również na celu porównanie testów diagnostycznych stosowanych w laboratoriach immunologicznych do pomiaru przeciwciał anty-ENA oraz sposobów poprawy tych testów i raportowania. Podwójna immunodyfuzja (DID) i kontrimmunoelektroforeza (CIEP), dwie formy technik żelowych , służą do uzyskania informacji na temat znaczenia klinicznego i roli tych przeciwciał u osób z CTD.

Techniki

Na bazie żelu

Od czasu odkrycia ENA są one wykorzystywane jako narzędzie diagnostyczne w chorobach tkanki łącznej. Do identyfikacji przeciwciał anty-ENA i ich powiązań z chorobą we wczesnych pracach wykorzystano dwie powszechnie stosowane techniki żelowe: podwójną immunodyfuzję (DID) [1] i kontrimmunoelektroforezę (CIEP). Obie te techniki wymagają precypitacji antygenów, aby uzyskać prawidłowe wyniki. W zależności od badanej anit-ENA, jedna technika może być stosowana zamiast drugiej. Na przykład antygen Scl-70 jest mniej naładowany ujemnie, co może skutkować przemieszczaniem się antygenu w tym samym kierunku co przeciwciało. Spowodowałoby to, że kompleks przeciwciało-antygen nie wytrącałby się; prowadzące do nieprawidłowych wyników. Ponadto za pomocą tej metody mogą nie zostać wykryte niektóre przeciwciała anty-SS-B powszechnie identyfikowane w zespole Sjögrena . Jednak ta metoda jest ekonomicznie wykonalna i specyficzna dla potwierdzenia diagnozy. Podczas przeglądania danych z tych technik żelowych należy zwrócić uwagę na dwie wrażliwości: czułość testu i czułość na chorobę. Czułość testu to zdolność rozpoznawania obecności przeciwciała, podczas gdy czułość choroby to zdolność rozpoznawania częstotliwości występowania przeciwciała w chorobie. Ze względu na ograniczenia technik żelowych pod względem wrażliwości na chorobę, zbadano inne techniki w celu zwiększenia czułości testu bez zmniejszania wrażliwości na chorobę. Na przykład u pacjentów z toczniem rumieniowatym układowym (SLE) tylko 8-40% ma wykrywalne przeciwciała anty-SM podczas stosowania testów żelowych. Wykazano, że CIEP jest bardziej czuły niż DID.

Hemaglutynacja, ELISA, Western Blot

Do identyfikacji ENA i powiązania ich z określonymi chorobami można zastosować trzy dodatkowe techniki, pasywną hemaglutynację, test immunoenzymatyczny (ELISA) i western blotting (WB). Bierna hemaglutynacja była popularna pod koniec lat 70. XX wieku, ale przeprowadzono bardzo niewiele badań z ich użyciem i była ona ograniczona do przeciwciał anty-Sm i przeciw białku rybonuklearnemu (RNP). Enzymatyczny test immunosorpcyjny (ELISA) stał się najczęściej stosowaną techniką testowania przeciwciał anty-ENA, ponieważ są proste w wykonaniu, ilościowe i wysokoobjętościowe. Chociaż ta metoda ma zwiększoną czułość testu i jest wydajna w laboratoriach o dużej objętości, ma znacznie niższą specyficzność względem choroby niż alternatywne techniki. Wynika to z niemożności prawidłowego wyizolowania ENA bez dużych kosztów ze względu na ich asocjację z kompleksami w jądrze komórkowym. Innym problemem związanym z techniką ELISA jest to, że przeciwciała anty-Sm były zgłaszane u pacjentów bez SLE, co prowadziłoby do nadmiernego badania, ale może być spowodowane jakością użytego źródła antygenu. Western blot ma główną wadę polegającą na tym, że nie można wykryć przeciwciał skierowanych przeciwko epitopom konformacyjnym. Ponadto może wystąpić fałszywie dodatni wynik, a swoistość choroby jest niższa niż w przypadku innych technik. Podczas gdy każda technika ma swoje zalety i wady, ELISA ma najmniej poważne wady potencjalnie fałszywych pozytywnych wyników (które są mniej niebezpieczne niż fałszywie negatywne) i kosztowne.

Wiele laboratoriów stosuje kombinację obu tych technik, aby poprawić wydajność bez poświęcania swoistości. Aktualne zalecenie warsztatów European Consensus polega na badaniu przesiewowym pod kątem pozytywnych przeciwciał anty-ENA za pomocą techniki ELISA. Bardziej szczegółowy test, taki jak CIEP, zostanie przeprowadzony z próbkami, które zostaną zidentyfikowane jako pozytywne.

Sześć głównych antygenów stosowanych w laboratoriach immunologicznych do wykrywania to Ro , La , Sm , RNP , Scl-70 i Jo1 , które są badane za pomocą technik podwójnej immunodyfuzji Ouchterlony i potwierdzane przez immunoblotting . W testach na przeciwciała przeciwjądrowe antygeny te mają wzór nakrapiany.

Terminologia

ENA pierwotnie odnosiły się do białek znajdujących się w solnym ekstrakcie jąder komórkowych . Od tego czasu składniki zostały wyraźniej zidentyfikowane i faktycznie obejmują wiele cząsteczek cytoplazmatycznych. Jednak błędna nazwa pozostała. Białka te są ściśle związane z różnymi cząsteczkami RNA i dlatego nazywane są rybonukleoproteinami , ale stosowane dla nich nazewnictwo jest często źródłem zamieszania. Sm, Ro i La zostały nazwane po pierwszych 2 literach nazwisk pacjentów, u których były pierwszy znaleziony. Dwa białka związane z zespołem Sjogrena zostały niezależnie opisane jako antygeny A i B, ale obecnie wiadomo, że są identyczne z odpowiednio Ro i La. tj. SS-A = Ro i SS-B = La.

Testy panelowe ENA (ekstrahowalny antygen jądrowy), test na obecność autoprzeciwciał przeciwko białkom w jądrze komórkowym. Termin „ekstrahowalny” pochodzi od zdolności do usuwania autoprzeciwciał z jąder za pomocą soli fizjologicznej i zwykłych białek. Metoda identyfikacji tych próbek jest powodem, dla którego są one również określane jako przeciwciała przeciwko antygenom ekstrahowanym z soli fizjologicznej.

ENA

Anty-ENA to grupa przeciwciał często stosowana do badań przesiewowych w kierunku mieszanej choroby tkanki łącznej (MCTD), zespołu Sjögrena i tocznia rumieniowatego układowego, która zwykle składa się z sześciu testów:

  • anty-Sm (dla SLE)
  • anty-RNP (dla MCTD)
  • anty-La/anty-SS-B (dla Sjögrena)
  • anty-Ro/anty-SS-A (dla Sjögrena)
  • anty-Scl70 (dla twardziny skóry)
  • anty-Jo (w zapaleniu skórno-mięśniowym)

Czułość i swoistość tych testów zależy od rodzaju zastosowanego testu i dlatego będzie się różnić w zależności od laboratorium. Poniższa tabela ilustruje czułość i specyficzność przeciwciał ENA w wykrywaniu SLE techniką ELISA.

Przeciwciało (testowane za pomocą ELISA) Czułość (%) dla SLE Swoistość (%) dla SLE
Anty-Ro (SS-A) 61 80-93
Anty-La (SS-B) 27-35 88-97
Anty-Sm 34-45 88-100
Anty-RNP 39-64 84-97
Odniesienie dla wszystkich wartości:

Ponadto testowanie ENA zostało również wykorzystane do badania zaburzeń związanych z pszenicą, takich jak celiakia . Badanie przeprowadzone w 2018 roku przebadało pacjentów z zaburzeniami związanymi z pszenicą pod kątem 10 przeciwciał anty-ENA.

  • SSA (Ro)
  • SSB (La)
  • RNP/Sm
  • Jo-1
  • Sm
  • Scl-70
  • Chromatyna
  • Centromer
  • Histon
  • Polimeraza RNA III

73% pacjentów z celiakią uzyskało pozytywny wynik testu na obecność antyhistonu i był on najbardziej rozpowszechniony, co jest typowo związane z toczniem rumieniowatym polekowym . To implikuje wysokie prawdopodobieństwo wystąpienia choroby autoimmunologicznej u pacjentów z zaburzeniami związanymi z pszenicą.

Bibliografia

Zewnętrzne linki